石蠟切片免疫組化WGA實驗操作-上海鄭核

一、實驗器材及試劑

1、實驗器材

名稱 廠家 型號

脫水機 武漢俊杰電子有限公司 JJ-12J

包埋機 武漢俊杰電子有限公司 JB-P5

病理切片機 上海徠卡儀器有限公司 RM2016

凍臺 武漢俊杰電子有限公司 JB-L5

組織攤片機 浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司 KD-P

烤箱 上?；厶﹥x器制造有限公司 DHG-9140A

載玻片 Servicebio

蓋玻片 江蘇世泰實驗器材有限公司 10212432C

脫色搖床 Servicebio TSY-B

渦旋混合器 Servicebio MX-F

掌上離心機 Servicebio D1008E

移液槍 Dragon KE0003087/KA0056573

組化筆 Gene tech GT1001

正置熒光顯微鏡 日本尼康 Nikon Eclipse C1

成像系統(tǒng) 日本尼康 Nikon DS-U3

2、主要實驗試劑

試劑 廠家 貨號 稀釋比

無水乙醇 國藥集團化學(xué)試劑有限公司

二甲苯 國藥集團化學(xué)試劑有限公司

PBS緩沖液 Servicebio G0002

WGA Thermo Fisher W21405

DAPI Servicebio G1012

抗熒光淬滅封片劑 Servicebio G1401

二、石蠟切片免疫熒光實驗步驟

1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。

2、染色：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加稀釋好的WGA染液，避光恒溫箱37°孵育30min。

3、DAPI復(fù)染細胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

4、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

5、鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm，發(fā)藍光；FITC激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光；CY3激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光

三、石蠟切片免疫熒光結(jié)果判讀

DAPI染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽性表達為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光。

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